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技術(shù)文章首頁(yè) > 技術(shù)文章 PEI轉(zhuǎn)染試劑在日常使用上需注意以下四點(diǎn)
  • PEI轉(zhuǎn)染試劑在日常使用上需注意以下四點(diǎn)
  • 點(diǎn)擊次數(shù):10185 更新時(shí)間:2021-01-26
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  •   PEI轉(zhuǎn)染試劑由納米高分子聚合物組成,分子內(nèi)含有許多氨基,在生理PH下會(huì)發(fā)生質(zhì)子化,這些質(zhì)子化的氨基可以中和DNA質(zhì)粒表面的負(fù)電荷,使DNA分子由伸展結(jié)枸壓縮為體積相對(duì)較小的DNA粒子,并包包裹在其中,使DNA免受核破醇的降解。轉(zhuǎn)染復(fù)合物主要是通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞作用將DNA轉(zhuǎn)移進(jìn)入細(xì)跑,形成內(nèi)合體,DNA從內(nèi)會(huì)體釋放,進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中,再進(jìn)一步進(jìn)入核內(nèi)轉(zhuǎn)錄、表達(dá)。通過(guò)納米技術(shù)生產(chǎn)出的PEI轉(zhuǎn)染試劑在納米尺度表現(xiàn)出結(jié)合保護(hù)DNA能力強(qiáng)、毒性低的*性能。
     
      PEI轉(zhuǎn)染試劑的注意事項(xiàng):
      1、質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高純度無(wú)內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA 濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。
      2、細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保細(xì)胞沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞。
      3、細(xì)胞培養(yǎng)液要求:PEI轉(zhuǎn)染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)染,并且轉(zhuǎn)染前不需要換培養(yǎng)基。但是,制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)要求用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑,因?yàn)檠鍟?huì)影響復(fù)合物的形成。確保細(xì)胞培養(yǎng)液沒(méi)有被細(xì)菌、真菌或支原體污染。轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)液中不添加抗生素。
      4、DNA濃度和PEI轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化:DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑使用量受細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件影響,初次使用應(yīng)優(yōu)化DNA濃度和轉(zhuǎn)染試劑量以得到大的轉(zhuǎn)染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。DNA和轉(zhuǎn)染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。
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